डी। यू। रियाज़त्सेव, ई। एम। चुडिनोवा, एल। यू। कोकेवा, एस। एन। एलांस्की, पी। एन। बालाबाको, जी। एल। बेलोवा, एस.के. ज़ाविक
फाइटोपैथोजेनिक कवक कोलेटोट्रिचम कोकॉड्स आलू और टमाटर में खतरनाक बीमारियों का कारण बनता है जिसे एन्थ्रेक्नोज और ट्यूबर ब्लैक स्पॉट के रूप में जाना जाता है। रूपात्मक विशेषताओं द्वारा, उन्हें अक्सर अन्य सूक्ष्मजीवों के कारण होने वाली बीमारियों से अलग करना मुश्किल होता है; हरे टमाटर के फलों पर, रोग स्पर्शोन्मुख हो सकता है, केवल पके लाल फलों पर प्रकट होता है। रोगज़नक़ के त्वरित और सटीक निदान के लिए, एक वास्तविक समय पीसीआर परीक्षण प्रणाली की पेशकश की जाती है। एक परीक्षण प्रणाली विकसित करने के लिए, रूस के विभिन्न क्षेत्रों में आलू के कंदों से पृथक 45 सी। कोकॉड्स उपभेदों के ग्लिसरॉल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज जीन का न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम निर्धारित किया गया था।
जेनबैंक डेटाबेस में उपलब्ध अन्य प्रजातियों के समान अनुक्रमों के प्राप्त परिणामों और विश्लेषण के आधार पर, सी-कोडेक्स के लिए प्रजातियों-विशिष्ट प्राइमरों और जांच को डिजाइन किया गया था। बनाई गई परीक्षण प्रणाली की विशिष्टता की जांच करने के लिए, पीसीआर को टमाटर और आलू के पौधों से जुड़े परजीवी और सैप्रोट्रोफिक कवक की 15 अलग-अलग प्रजातियों की शुद्ध संस्कृतियों से अलग डीएनए के साथ किया गया था (फुसैरियम ऑक्सिस्पोरम, एफ। वर्टिसिलियम, फोमोप्सिस फेजोली, अल्टरनेरिया अल्टरनेटा, हेलमिनथोस्पोरियम सोलानी, कोलेट्रिच) Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp।, Cladosporium fulvum, C. cladosporioides)। Colletotrichum coccodes DNA की उपस्थिति 20–27 के थ्रेशोल्ड चक्र में निर्धारित की गई थी, जबकि अन्य प्रजातियों का पता 40 चक्रों के बाद लगाया गया था या पता नहीं लगाया गया था। परीक्षण प्रणाली विश्लेषण किए गए पीसीपी मिश्रण में 0.01 एनजी / एमएम 3 से अधिक सी। कोकोड्स डीएनए सांद्रता का दृढ़ता से पता लगाने के लिए संभव बनाता है। विकसित परीक्षण प्रणाली का उपयोग करके, टमाटर के पत्तों में सी। कोकेड्स की उपस्थिति फंगल रोगों के लक्षणों के साथ और रोग के बाहरी लक्षणों के बिना आलू के कंदों में जांच की गई। क्रास्नोदर क्षेत्र में दो अलग-अलग क्षेत्रों से कवक संक्रमण के लक्षणों के साथ पत्तियां एकत्र की गईं, कस्टर - कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा, निज़नी नोवगोरोड क्षेत्रों में। सी। कोकोसोड डीएनए युक्त एक टमाटर का पत्ता क्रास्नोडार क्षेत्र में पाया गया; कोस्ट्रोमा, मास्को, कलुगा क्षेत्रों में उगने वाले कंद के 5 नमूनों में इस रोगज़नक़ के डीएनए की महत्वपूर्ण उपस्थिति का पता चला था।
परिचय
जीनस कोलुंगोट्रिचम का कवक अनाज, सब्जियां, जड़ी-बूटियों, बारहमासी फल और बेरी के पौधों को प्रभावित करने वाले खतरनाक फाइटोपथोगेंस हैं। इस जीनस के सर्वव्यापी प्रजातियों में से एक, कोलेलेट्रिचम कोकोड्स (वालर)।
ह्यूजेस, एंथ्रेक्नोज का प्रेरक एजेंट है और आलू और टमाटर का काला स्थान है, और सोलनेसी परिवार के कई अन्य पौधों की बीमारियों का कारण बनता है। मातम (डिलार्ड, 1992)। सी। कोकोड्स पौधे के सभी भूमिगत भागों, तने के आधार, पत्तियों और फलों (एंड्रीवन एट अल, 1998; जॉनसन, 1994) को संक्रमित करता है। संक्रमित आलू के कंद के छिलके पर, स्पष्ट रूप से स्पष्ट किनारों के साथ भूरे रंग के धब्बे का विकास देखा जाता है, जिस पर स्पोरुलेशन और माइक्रोस्कोलरोटिया के काले बिंदु स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। भंडारण के दौरान, नरम सामग्री वाले अल्सर कंद के गूदे में बन सकते हैं, अर्थात। रोग एन्थ्रेक्नोज चरण में प्रवेश करता है, जो, हालांकि, अत्यंत दुर्लभ है।
इसी समय, टमाटर के फलों पर एन्थ्रेक्नोज (छोटे काले डॉट्स के साथ त्वचा के अल्सर) के लक्षण विशिष्ट हैं। पत्तियों पर, सी। कोकोड्स के लक्षण गहरे भूरे रंग के धब्बे के रूप में दिखाई देते हैं, जो आमतौर पर पीले ऊतक (जॉनसन, 1994) द्वारा सीमाबद्ध होते हैं।
कंद पर काले धब्बे का विकास उनकी उपस्थिति को खराब कर देता है, जो विशेष रूप से धोया गया लाल-छील आलू बेचने पर होता है। पील एक्सफोलिएशन से अतिरिक्त वाष्पीकरण होता है और स्टोरेज लॉस बढ़ जाता है (हंगर, मैकइंटायर, 1979)। अन्य पौधों के अंगों को नुकसान पहुंचने से नुकसान होता है, जो खुले और बंद मैदान (जॉनसन, 1994, Tsror एट अल।, 1999) दोनों में नोट किया गया था। सी। कोकोड के कारण होने वाले रोग दुनिया के लगभग सभी आलू उत्पादक क्षेत्रों में आम हैं, जिनमें रूस (लेसा, हिल्टन, 2003; बेलोव एट अल, 2018) शामिल हैं। सी। के खिलाफ मौजूदा कवकनाशी की अपर्याप्त प्रभावशीलता और प्रतिरोधी किस्मों (पढ़ें, छिपाएँ, 1995) की कमी के कारण इन बीमारियों का नियंत्रण मुश्किल है।
सी। कोकेडोम का इनकोड बीज के कंद (पढ़ें, छिपाएं, 1988; जॉनसन एट अल, 1997), टमाटर के बीज (बेन-डैनियल एट अल।, 2010) में बना रह सकता है, पौधे के मलबे (डिलार्ड, 1990) पर मिट्टी में लंबे समय तक जीवित रहते हैं। ; डिलार्ड, कोब, 1993) और मातम में (रेड, पेनीपैकर, 1987)। कई लेखकों के काम (पढ़ें, छिपाएं, 1988; बरकडॉल, डेविस, 1992; जॉनसन एट अल; 1997; डिलार्ड, कॉब, 1993) ने दिखाया है कि आलू और टमाटर में रोग का विकास काफी हद तक बीज और इनोकुलम की उपस्थिति पर निर्भर करता है। मिट्टी। इसलिए, बीमारी से नुकसान को कम करने के लिए, बीज सामग्री में, मिट्टी में, बीज आलू कंद और भंडारण के लिए रखे टमाटर के बीज में कवक के प्रसार (निदान सहित) का निदान करना आवश्यक है। मिट्टी और पौधों की सामग्री में रूपात्मक निदान केवल माइक्रोस्कोलोटिया की उपस्थिति से किया जा सकता है, जो कि अन्य प्रकार के कवक में भी पाए जाते हैं।
कंद पर लक्षण फफूंद हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानी के कारण होने वाले सिल्वर स्कैब के समान हैं। Colletotrichum coccodes और Helminthosporium solani का एक शुद्ध संस्कृति में अलगाव मुश्किल है, लेकिन एक पोषक माध्यम पर धीमी गति से विकास के कारण एक लंबा समय लगता है। कोलेलेट्रिचम कोकोड्स को जल्दी से पहचानने के लिए, वाद्य निदान विधियों का उपयोग करना आवश्यक है। सबसे सुविधाजनक विधि पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) और इसका संशोधन है - वास्तविक समय पीसीआर। वर्तमान में, rDNA के ITS2002 क्षेत्र के लिए ब्रिटिश शोधकर्ताओं (कुलेन एट अल।, 1) द्वारा विकसित एक परीक्षण प्रणाली का उपयोग यूरोप और संयुक्त राज्य अमेरिका में किया जाता है। इसके उपयोग ने रूसी आइसोलेट्स (बेलोव एट अल, 2018) के विश्लेषण में अच्छे परिणाम दिखाए हैं। हालांकि, सी। कोडेक्स अत्यधिक परिवर्तनशील है और एकल डीएनए अनुक्रम से इसका पता लगाने से गलत नकारात्मक परिणाम हो सकते हैं। अधिक विश्वसनीय निदान के लिए, कई प्रजातियों-विशिष्ट डीएनए अनुक्रमों के लिए विश्लेषण की आवश्यकता होती है, जिसके संबंध में हमने एक मूल परीक्षण प्रणाली विकसित की है जो ग्लिसराल्डिहाइड-3-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज जीन के अनुक्रम द्वारा सी। कोकोड्स की पहचान करने की अनुमति देता है।
सामग्री और तरीके
निर्मित परीक्षण प्रणालियों की दक्षता और विशिष्टता का आकलन करने के लिए, हमने टमाटर की पत्तियों और फलों, आलू कंद (तालिका 15) के रोगग्रस्त नमूनों से लेखकों द्वारा पृथक कवक की 1 प्रजातियों की शुद्ध संस्कृतियों का उपयोग किया। अलगाव के लिए, फंगल संक्रमण के लक्षणों वाले पौधों के अंगों को लिया गया था, प्रति बुश एक अंग से अधिक नहीं।
एक छिलके के साथ एक कंद का एक टुकड़ा, एक टमाटर फल का एक टुकड़ा, और एक प्रभावित पत्ती को एक दूरबीन माइक्रोस्कोप के नीचे रखा गया था, जिसके बाद एक तेज विदारक सुई के साथ पेट्री डिश में मायसेलियम, बीजाणु, या ऊतक का एक टुकड़ा एक अगरर माध्यम (वॉर्ट एगर) में स्थानांतरित कर दिया गया था। आइसोलेट्स को 4 डिग्री सेल्सियस पर टेस्ट ट्यूब में अलग किया गया था।
कटाई के तुरंत बाद (खेत में) फंगल रोगों के लक्षणों के विश्लेषण के लिए टमाटर के पत्तों के नमूने 70% एथिल अल्कोहल में रखे गए थे जिसमें उन्हें डीएनए अलगाव तक रखा गया था। आलू के कंद प्रयोगशाला से वितरित किए गए, (2 × 1 सेमी टुकड़ा) उनसे, और जमे हुए -20 डिग्री सेल्सियस पर। डीएनए अलगाव तक जमे हुए संग्रहीत।
डीएनए अलगाव के लिए कवक की शुद्ध संस्कृतियों को तरल मटर के माध्यम में उगाया गया था। कवक के माइसेलियम को तरल माध्यम से हटा दिया गया था, फिल्टर पेपर पर सुखाया गया, तरल नाइट्रोजन में जमे हुए, homogenized, CTAB बफर में इन्क्यूबेट किया गया, क्लोरोफॉर्म से शुद्ध किया गया, आइसोप्रानोल और 0.5 एम पोटेशियम एसीटेट के मिश्रण के साथ अवक्षेपित किया गया, और 2% शराब के साथ दो बार धोया गया। परिणामी डीएनए को विआयनीकृत पानी में भंग कर दिया गया था और -70 ° С (कुतुज़ोवा एट अल।, 20) में संग्रहीत किया गया था। क्यूबिट 2017 (क्यूजेन, जर्मनी) पर दोहरे फंसे डीएनए के लिए एचएस डीएनए परिमाणीकरण किट का उपयोग करके डीएनए एकाग्रता का मापन किया गया। अल्कोहल युक्त और जमे हुए नमूनों को तरल नाइट्रोजन में ट्रिट्यूरेट किया गया था, फिर डीएनए निष्कर्षण को ऊपर वर्णित (शुद्ध कवक संस्कृतियों के माइसेलियम के लिए) किया गया था।
तालिका 1. प्रयुक्त कवक उपभेदों की उत्पत्ति
मशरूम नाम | पौधा, अंग | चयन का स्थान |
---|---|---|
कोलेटोट्रिचम कोकोड्स 1, सी। कोकोड्स 2, सी। कोकोड्स 3, इलियोनेक्ट्रिया क्रैसा, राइजोक्टोनिया सोलानी | आलू कंद | कोस्त्रोमा क्षेत्र, पहली क्षेत्र पीढ़ी के आलू कंद, कृषक रेड स्कारलेट |
कोलेटोट्रिचम कोकोड्स 4 | आलू का पत्ता | रेप। मारी एल, योश्कर-ओला |
हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानी | आलू कंद | मगदान क्षेत्र, स्थिति। टेंट, आलू कंद |
क्लैडोस्पोरियम फुलवम | टमाटर का पत्ता | मॉस्को क्षेत्र, बड़े पैमाने पर टमाटर |
अल्टरनेरिया टोमाटोफिला | टमाटर का फल | ऑल-रशियन रिसर्च इंस्टीट्यूट ऑफ प्लांट प्रोटेक्शन के माइकोलॉजी और फाइटोपैथोलॉजी की प्रयोगशाला के कर्मचारियों द्वारा प्रस्तुत किया गया |
फुसैरियम वर्टिसिलियम, फ़ोमोप्सिफ़ेज़ोली, अल्टरनेरिया अल्टरटाटा, पेलिनस फ़ेरुगाइनोवेल्यूटिनस, स्टेम्फ़िलियम वेसिकेरियम, क्लैडोस्पोरियम क्लैडोस्पोरिओइड्स, एक्रोडियम लिज़ूला, पेनिसिलियम सपा। | टमाटर का फल | क्रास्नोडार क्षेत्र, क्रिम्स्की जिला, ग्रेड क्रीम |
फ्यूजेरियम oxysporum | गेहूं की जड़ | मास्को क्षेत्र |
पीसीआर को डीटीप्राइम एम्पलीफायर (डीएनए-टेक्नोलॉजी) पर किया गया। पीसीआर के लिए, मूल प्राइमरों और ग्लिसरॉल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज जीन के प्रजातियों-विशिष्ट क्षेत्र के लिए एक जांच का उपयोग किया गया था: फॉरवर्ड प्राइमर Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, रिवर्स प्राइमर Coc280gdr - TACTTGAGCATGTTGGGGTGGT1। प्राइमर 213 बीपी क्षेत्र को बढ़ाते हैं।
प्रतिक्रिया में कुल डीएनए का 50 एनजी (पत्तियों और कंदों का विश्लेषण करते समय) और 10 एनजी (शुद्ध फंगल संस्कृतियों के डीएनए का विश्लेषण करते समय) लिया गया। प्रतिक्रिया मिश्रण (35 μl) को दो भागों में एक पैराफिन परत द्वारा अलग किया गया था: निचले एक (20 μl) में 2 × प्रतिक्रिया बफर के 10 μl (750 मिमी Tris-HCl, पीएच 8.8; 200 मिमी (NH4) 2SO4; 25 मिमी MgCl2; 0.1% ट्वीन) शामिल थे। 20), प्रत्येक डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट के 0.5 मिमी, प्रत्येक प्राइमर के 7 pmol और हाइड्रोलाइज़ेबल फ्लोरोसेंट जांच के 4 pmol; ऊपरी में 1 × PCR बफर का 10 μl और Taq पोलीमरेज़ का 1 U सम्मिलित है।
पैराफिन के साथ मिश्रण को अलग करने से ट्यूबों को 5 ° C के तापमान पर लंबे समय तक संग्रहीत किया जा सकता है और 10 ° C से ऊपर के तापमान पर 80 मिनट तक गर्म करने के बाद PCR के लिए एक गर्म शुरुआत प्रदान करता है। पीसीआर निम्नलिखित कार्यक्रम के अनुसार किया गया था: 94.0 डिग्री सेल्सियस - 90 एस (1 चक्र); 94.0 डिग्री सेल्सियस - 30 एस; 64.0 डिग्री सेल्सियस - 15 एस (5 चक्र); 94.0 डिग्री सेल्सियस - 10 एस; 64.0 डिग्री सेल्सियस - 15 एस (45 चक्र); 10.0 डिग्री सेल्सियस - भंडारण।
परिणाम और चर्चा
ग्लिसरॉल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज जीन के अनुक्रम रूस के विभिन्न क्षेत्रों में पत्तियों, उपजी, आलू कंद, और टमाटर के फल (कुतुज़ोवा, 45) से अलग 2018 उपभेदों में निर्धारित किए गए थे। सभी उपभेदों के अध्ययन के अनुक्रमों को दो न्यूक्लियोटाइड में अलग-अलग 2 समूहों में विभाजित किया गया था। KY496634 और KY496635 संख्या के तहत दोनों समूहों के प्रतिनिधियों के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम GenBank में जमा किए जाते हैं।
प्राइमर coc70gdf, coc280gdr और उनके आधार पर तैयार किए गए cocgdz जांच को BLAST प्रोग्राम (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) GenBank डेटाबेस में उपलब्ध जीनस कोलेलेट्रिचम और अन्य जीवों की प्रजातियों के ग्लिसरॉल ट्राइफॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज जीन के सभी अनुक्रमों पर।
अन्य जीवों के कोई डीएनए क्षेत्र प्राइमर और जांच के लिए अत्यधिक सजातीय नहीं थे।
परीक्षण प्रणाली की संवेदनशीलता को सी। कोकोसोड डीएनए, एन्थ्रेक्नोज से संक्रमित एक आलू के पत्ते के डीएनए (मैरी एल में 2017 में एकत्र, विभिन्न लाल स्कारलेट), और ब्लैक स्पॉट से प्रभावित कंदों के छिलके (कॉस्ट्रोमा क्षेत्र में एकत्र) के नमूनों का उपयोग करके जांच की गई थी। विविधता लाल स्कारलेट, तालिका 2)। कंद और आलू के पत्तों में डीएनए की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, सी। कोडेक्स उपभेदों को शुद्ध संस्कृतियों में अलग कर दिया गया था।
परीक्षण प्रणाली के संवेदनशीलता विश्लेषण के परिणाम बताते हैं कि इसका उपयोग सफलतापूर्वक एक नमूने में सी। कोकोसोड डीएनए की उपस्थिति का निदान करने के लिए किया जा सकता है यदि पीसीआर मिश्रण में इसकी कुल सामग्री 0.05 एनजी से अधिक है। यह पता लगाने के लिए काफी पर्याप्त है, क्योंकि एक स्क्लेरोटिया में औसतन 0.131 एनजी होता है, और एक बीजाणु में लगभग 0.04 एनजी डीएनए (कुलीन एट अल।, 2002) होता है। ब्रिटिश समूह द्वारा विकसित परीक्षण प्रणाली (कुलेन एट अल।, 2002) ने इसी तरह की संवेदनशीलता दिखाई (थ्रेशोल्ड चक्र 34 में 0.05 एनजी डीएनए और 37 0.005 एनजी पर)।
सभी मामलों में सी। कोडेक्स वाले प्राकृतिक नमूनों के विश्लेषण से नमूना (तालिका 2) में इसकी उपस्थिति को मज़बूती से प्रकट करना संभव हो गया। डीएनए अलगाव के लिए प्रस्तावित विधि प्राकृतिक पौधों के नमूनों के विश्लेषण के लिए भी लागू थी।
तालिका 2. वास्तविक समय पीसीआर के लिए कोलेटोट्रिचम कोकोड्स की पहचान के लिए प्रस्तावित परीक्षण प्रणाली की संवेदनशीलता का निर्धारण
नमूना | नमूने में डीएनए की मात्रा *, एनजी | थ्रेशोल्ड चक्र | सी। कोडकॉड्स का पता लगाना |
---|---|---|---|
माइसेलियम कोलेटोट्रिचम कोकोड्स | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
कंद छिलका १ | 50 | 32 | + |
कंद छिलका १ | 50 | 30 | + |
कंद छिलका १ | 50 | 31.5 | + |
आलू का पत्ता | 50 | 29.5 | + |
ध्यान दें। * पीसीआर उत्पादों के मिश्रण में।
कवक की 15 प्रजातियों से निकाले गए डीएनए नमूनों पर परीक्षण प्रणाली की विशिष्टता का परीक्षण किया गया था। कवक के सभी उपभेदों को प्रभावित और स्वस्थ फलों और टमाटर, आलू कंद की पत्तियों से लेखकों द्वारा अलग किया गया था; गेहूं की जड़ (तालिका 1) से एक तनाव को अलग किया गया था। फलों की सतह से अलग-थलग प्रजातियों में, ऐसी प्रजातियां भी हैं जो टमाटर के लिए रोगजनक नहीं हैं (उदाहरण के लिए, पेहेलिनस फेरुगाइनोवेल्यूटिनस)।
अध्ययनों से पता चला है कि सी। कोकोड्स डीएनए का पता 20–27 के थ्रेशोल्ड चक्र में लगाया गया था, जबकि अन्य फंगल प्रजातियों का पता नहीं चला था या चक्र 40 के बाद एक संकेत दिया गया था, जिसे एक निरर्थक शोर प्रभाव (तालिका 3) के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।
तालिका 3. विभिन्न प्रकार के मशरूम के लिए परीक्षण प्रणाली की जाँच करना
मशरूम नाम | थ्रेशोल्ड चक्र |
कोलेलेट्रिचम कोकोड्स 1 | 20.9 |
सी। कोकॉड्स 2 | 22.6 |
सी। कोकॉड्स 3 | 23 |
सी। कोकॉड्स 4 | 22 |
फ्यूजेरियम oxysporum | > 40 |
एफ। वर्टिसिलियम | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis प्रावस्था | > 40 |
अल्टरनेरिया अल्टरनेटा | > 40 |
A. टोमेटोफिला | > 40 |
हेल्मिन्थोस्पोरियम सोलानी | > 40 |
फेलिनस फेरुगिनोवेलुटिनस | > 40 |
स्टेफिलियम वेसिकैरियम | > 40 |
इलियोनक्ट्रिया क्रैसा | > 40 |
क्लैडोस्पोरियम क्लैडोसपोरिओइड्स | > 40 |
सी। फुलवुम | > 40 |
एक्रोडॉन्टियम लुज़ुला | > 40 |
पेनिसिलियम सपा। | > 40 |
ध्यान दें। * सभी नमूनों में डीएनए की मात्रा 10 एनजी थी।
विकसित परीक्षण प्रणाली का उपयोग दिखाई देने वाले लक्षणों के बिना नेक्रोट्रोफिक रोगजनकों और बीज आलू कंद के लक्षणों के साथ टमाटर के पत्तों के नमूनों में सी। कोकोड्स की पहचान करने के लिए किया गया था। अध्ययन के लिए, हमने कोस्त्रोमा, मॉस्को, कलुगा, निज़नी नोवगोरोड क्षेत्रों में उगाए गए विभिन्न किस्मों के बीज कंद ले गए। सी। कोकोड्स डीएनए की उपस्थिति को नमूनों में महत्वपूर्ण माना गया था, जिसके विश्लेषण में थ्रेशोल्ड चक्र 35 से अधिक नहीं था। यह थ्रेशोल्ड वैल्यू सी। कोडेक्स डीएनए (थ्रेशोल्ड साइकल 0.05, टेबल 33.5) के 2 एनजी के विश्वसनीय निर्धारण के आधार पर चुना गया था और तथ्य यह है कि 40 से ऊपर दहलीज चक्र, कवक के कुछ अन्य प्रजातियों के निरर्थक डीएनए का निदान किया गया था। इस दृष्टिकोण के साथ, कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा क्षेत्रों में और कस्कोरोड क्षेत्र के येइस्क जिले से एक टमाटर के पत्ते में उगाए गए 5 नमूनों में सी। कोकोस डीएनए की महत्वपूर्ण उपस्थिति का पता चला।
तालिका 4. आलू कंद पर कोलेटोट्रिचम कोकोड्स का पता लगाना *
नमूने की संख्या | आलू की विविधता | वृद्धि का स्थान | सी। कोडकॉड्स का पता लगाना | थ्रेशोल्ड चक्र |
---|---|---|---|---|
1 | लाल दुपट्टा | कोस्त्रोमा क्षेत्र | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | Sante | मास्को क्षेत्र | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | जल्दी Zhukovsky | मास्को क्षेत्र | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | पतुरिया | कलुगा क्षेत्र। | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | कल्पना | कलुगा क्षेत्र। | - | |
15 | पर्व | निज़नी नोवगोरोड क्षेत्र। | - | |
16 | - |
ध्यान दें। * सभी नमूनों में डीएनए की मात्रा 50 एनजी थी।
तालिका 5. टमाटर की पत्तियों पर कोलेटोट्रिचम कोकोड्स का पता लगाना *
नमूने की संख्या | वृद्धि का स्थान | सी। कोडकॉड्स का पता लगाना | थ्रेशोल्ड चक्र |
---|---|---|---|
1 | क्रास्नोडार क्षेत्र, क्रीमियन जिला | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | क्रास्नोडार क्षेत्र, येस्क जिला | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* सभी नमूनों में डीएनए की मात्रा 50 एनजी थी।
संवेदनशीलता और विशिष्टता में ब्रिटिश शोधकर्ताओं (कुलेन एट अल।, 2002) द्वारा विकसित उस के लिए हमारे द्वारा बनाई गई परीक्षण प्रणाली हीन नहीं है और पौधे के नमूनों के विश्लेषण के लिए उपयुक्त है। बीज कंदों के विश्लेषण के लिए इसके आवेदन ने नुकसान के बाहरी संकेतों के बिना और पत्तियों के संक्रमण का सफलतापूर्वक विश्लेषण करने के लिए कंदराओं में डीएनए की पहचान की।
आज तक, रूस में सी। कोकोड्स के उल्लंघन के लिए आलू के कंदों का कोई विश्लेषण नहीं किया गया है। हमारे पहले अध्ययन से पता चला है कि रूसी संघ के विभिन्न क्षेत्रों में उगाए गए 16 टेस्टेड बीज कंदों में से 5 में सी। कोकोड्स हैं। इससे पता चलता है कि रूस में आलू के कंदों का काला धब्बा एक आम बीमारी है, और आलू की फसल की मात्रा और गुणवत्ता को कम करने में इसकी भूमिका को कम करके आंका जाता है।
टमाटर के पत्तों के विश्लेषण से क्रास्नोडार क्षेत्र के येइक जिले से एक पत्ते में सी। कोकोसोड डीएनए की महत्वपूर्ण उपस्थिति का पता चला। इससे पहले, जब ब्रिटिश परीक्षण प्रणाली (कलन एट अल।, 2002) का उपयोग करके दक्षिणी रूस में टमाटर के खेतों की जांच की गई थी, सी। कोकेड्स वाले पत्ते पाए गए थे, और कुछ क्षेत्रों में सी। कोडॉक्स से संक्रमित पत्तियों का एक उच्च अनुपात पाया गया था (बेलोवेन अल अल।) 2018)। मॉस्को क्षेत्र के क्रास्नोडार और प्रिमोर्स्की प्रदेशों में, हमें टमाटर के फल मिले, जिससे हम सी। कोडक की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने में कामयाब रहे। यह संभव है कि रूस में टमाटर की तुलना में सी। कोडेक अधिक व्यापक है, और अब इसकी हानिकारकता को भी कम आंका जाता है।
इस प्रकार, आज तक, आलू और टमाटर पर सी। के व्यापक वितरण पर पर्याप्त जानकारी जमा हो गई है।
आलू और टमाटर रोगों के विकास में इस कवक की भूमिका को बेहतर ढंग से समझने के लिए, रूस में इसकी व्यापकता की व्यापक निगरानी, मिट्टी और बीज संक्रमण की भूमिका का अध्ययन, और भंडारण के दौरान नुकसान में ब्लैक स्पॉट की भूमिका की आवश्यकता है। पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के उपयोग से इस काम में काफी सुविधा हो सकती है, और दोनों परीक्षण प्रणालियों के एक साथ उपयोग से विश्लेषण की सटीकता में काफी वृद्धि होगी।
यह काम रूसी विज्ञान फाउंडेशन नंबर 18-76-00009 से अनुदान द्वारा समर्थित था।
लेख "माइकोलॉजी एंड फाइटोपथोलॉजी" (वॉल्यूम 54, नंबर 1, 2020) पत्रिका में प्रकाशित हुआ था।